Estudio de diversidad genotípica y del efecto del antibiótico azitromicina en la infeccion por el patógeno respiratorio Haemophilus influenzae no tipificable

Abstract

Haemophilus infuenzae no tipificable (HiNT) es una bacteria Gram negativa que forma parte de la microbiota nasofaríngea humana y un patógeno oportunista. En pacientes con patologías como la Enfermedad Obstructiva Pulmonar Crónica (EPOC), HiNT coloniza de forma persistente las vías respiratorias bajas, causando infecciones crónicas. Los pacientes EPOC sufren periodos de agudización de la enfermedad, en los cuales se puede aislar HiNT a partir de muestras respiratorias como el esputo. En este trabajo, hemos determinado la variabilidad genética de cepas clínicas de HiNT aisladas de esputos de pacientes EPOC durante periodos de agudización de la enfermedad. La tipificación de las cepas recogidas se ha realizado mediante electroforesis en campo pulsado (PFGE). De esta forma, se ha determinado si la infección se ha producido por una o varias cepas en un total de 13 pacientes. Además, HiNT puede adquirir un plásmido portador del gen rob-1, que proporciona resistencia a antibióticos β-lactámicos. En este trabajo hemos analizado la presencia del gen rob-1 en cepas de HiNT procedentes de pacientes EPOC. Por último, la azitromicina es un antibiótico macrólido administrado a pacientes EPOC para prevenir o tratar las exacerbaciones. Hemos determinado el efecto de la azitromicina durante la infección de células epiteliales y macrófagos alveolares por las cepas HiNT375 y HiNT353, que presentan distinto nivel de susceptibilidad a azitromicina

Nontypable Haemophilus influenzae (NTHi) is a Gram-negative bacterium part of the human respiratory microbiota, and an opportunistic pathogen. In Chronic Obstructive Pulmonary Disease (COPD) patients, NTHi colonizes the lower airways causing chronic respiratory infection. COPD patients suffer exacerbation episodes. NTHi can be isolated from respiratory samples such a as sputum during COPD exacerbation. In this study, we determined the genetic variability of NTHi clinical strains isolated from sputum samples of COPD patients during exacerbation. Strain genotyping was carried out by Pulse Field Gel Electrophoresis (PFGE). We then determined the number of non-clonal strains associated to respiratory infection suffered by 13 COPD patients. Moreover, NTHi clinical strains can contain a natural plasmid carrying the β-lactamase encoding gene rob-1. In this work, we analyzed the absence/presence of rob-1 in our collection of NTHi strains isolated from COPD patients. Finally, azithromycin is a macrolide antibiotic often administered to COPD patients, to prevent or treat exacerbation. We determined the effect of azithromycin on epithelial and alveolar macrophage infection by the clinical strains NTHi375 and NTHi353, presenting different susceptibility to azithromycin