Aguirre Sánchez, Eduardo

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https://academica-e.unavarra.es/handle/2454/48458

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Aguirre Sánchez

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Eduardo

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Producción Agraria

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IMAB. Research Institute for Multidisciplinary Applied Biology

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0000-0003-1427-6780

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    PublicationOpen Access
    Efecto de las enhancinas sobre las propiedades insecticidas de los baculovirus
    (2014) Aguirre Sánchez, Eduardo; Simón de Goñi, Oihane; Caballero Murillo, Primitivo; Escuela Técnica Superior de Ingenieros Agrónomos; Nekazaritza Ingeniarien Goi Mailako Eskola Teknikoa
    El objetivo del presente trabajo fue caracterizar molecularmente una enhancina (VEF, virus enhancing factor) localizada en el genoma de un granulovirus de Agrotis segetum (AgseGV) aislado en Badajoz y determinar su efecto sobre la actividad insecticida del Alphabaculovirus de Autographa californica (AcMNPV) para distintas especies de insectos susceptibles. La enhancina de AgseGV presentó un 99% de identidad con la enhancina de otro aislado del AgseGV de China (AY522332) mientras la identidad con las VEFs localizadas en el NPV de A. segetum AgseNPV (DQ123841) sólo fue del 24-28%. Las VEFs del AgseGV y del AgseNPV presentan una valina (HVMGH) y una alanina (HAISF), respectivamente, en el motivo de unión a zinc en vez del característico ácido glutámico (HEXXH) de las metaloproteasas lo que sugiere que carezcan de funcionalidad. Para determinar su posible funcionalidad se construyeron recombinantes mediante el sistema Bac-to-Bac con el AcMNPV, y las VEFs del AgseGV (BacENHAgseGV) y del AgseNPV (BacVEF1AgseNPV, BacVEF2AgseNPV y BacVEF3AgseNPV). La incorporación del gen de la enhancina de AgseGV en BacENHAgseGV se comprobó mediante PCR, análisis de restricción y secuenciación; sin embargo, no se detectó expresión génica en células Sf21 infectadas con el BacENHAgseGV. El análisis de los componentes proteicos de OBs recombinantes en geles de SDS-PAGE tampoco reveló la presencia de bandas del tamaño correspondiente al de las enhancinas (100-115 kDa). Este dato sugiere que no ha habido síntesis de la enhancina o que si ha habido síntesis no se ha incorporado a los OBs. Finalmente, se cuantificó la actividad insecticida de los recombinantes en larvas L2 y L4 de distintas especies de lepidópteros. En ninguna de las especies ensayadas se pudo apreciar una mejora de la actividad insecticida de los virus recombinantes, mientras que en el control positivo, Bacᴓ al que se añadió Tinopal UNPA-GX, si hubo una mejora significativa de la actividad biológica del virus para las larvas L4. En base a los resultados obtenidos, podríamos concluir que los baculovirus recombinantes no expresan las correspondientes enhancinas, lo cual sugiere la necesidad de abordar la construcción de nuevos recombinantes que contemplen la inclusión de los promotores nativos de los genes de las enhancinas que se quieran expresar
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    PublicationOpen Access
    Genetic variability of Chrysodeixis includens nucleopolyhedrovirus (ChinNPV) and the insecticidal characteristics of selected genotypic variants
    (MDPI, 2019) Aguirre Sánchez, Eduardo; Beperet Arive, Inés; Williams, Trevor; Caballero Murillo, Primitivo; Institute for Multidisciplinary Research in Applied Biology - IMAB
    Genetic variation in baculoviruses is recognized as a key factor, not only due to the influence of such variation on pathogen transmission and virulence traits, but also because genetic variants can form the basis for novel biological insecticides. In this study, we examined the genetic variability of Chrysodeixis includens nucleopolyhedrovirus (ChinNPV) present in field isolates obtained from virus-killed larvae. Different ChinNPV strains were identified by restriction endonuclease analysis, from which genetic variants were isolated by plaque assay. Biological characterization studies were based on pathogenicity, median time to death (MTD), and viral occlusion body (OB) production (OBs/larva). Nine different isolates were obtained from eleven virus-killed larvae collected from fields of soybean in Mexico. An equimolar mixture of these isolates, named ChinNPV-Mex1, showed good insecticidal properties and yielded 23 genetic variants by plaque assay, one of which (ChinNPV-R) caused the highest mortality in second instars of C. includens. Five of these variants were selected: ChinNPV-F, ChinNPV-J, ChinNPV-K, ChinNPV-R, and ChinNPV-V. No differences in median time to death were found between them, while ChinNPV-F, ChinNPV-K, ChinNPV-R and ChinNPV-V were more productive than ChinNPV-J and the original mixture of field isolates ChinNPV-Mex1. These results demonstrate the high variability present in natural populations of this virus and support the use of these new genetic variants as promising active substances for baculovirus-based bioinsecticides.