Person:
Sabalza Baztán, Amaia

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https://academica-e.unavarra.es/handle/2454/49930

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Sabalza Baztán

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Amaia

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Instituto de Agrobiotecnología (IdAB)

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810985

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Subject: Celulosa × Subject: Salmonella ×

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    PublicationOpen Access
    Obtención de un alelo de celulosa sintetasa capaz de producir celulosa en ausencia del activador alostérico c-di-GMP
    (2014) Sabalza Baztán, Amaia; Lasa Uzcudun, Íñigo; Escuela Técnica Superior de Ingenieros Agrónomos; Nekazaritza Ingeniarien Goi Mailako Eskola Teknikoa
    La celulosa es uno de los principales componentes de la matriz extracelular de los biofilms formados por algunas especies bacterianas. Los genes involucrados en su síntesis, en el caso de Salmonella Enteritidis, se encuentran recogidos en dos operones denominados bcsABZC y bcsEFG. De todos estos genes caben destacar bcsA y bcsB, que forman un complejo interno de membrana que es suficiente para que se produzca la síntesis in vitro del polímero. La activación de bcsA para iniciar la síntesis de celulosa requiere la presencia del mensajero secundario c-di-GMP, que activa de forma alostérica a la enzima al interaccionar con su dominio PilZ. En este estudio se ha planteado producir una celulosa sintetasa capaz de sintetizar celulosa sin necesidad de unir c-di-GMP. Esta nueva enzima permitiría optimizar el proceso de producción de celulosa para aplicaciones industriales y biomédicas. En el estudio hemos utilizado dos aproximaciones, mutaciones aleatorias en el dominio PilZ y mutagénesis dirigida sobre la arginina de la posición 696 de bcsA, mutación que durante la realización de este trabajo se ha descrito causa in vitro la activación constitutiva de la celulosa sintetasa de Rhodobacter sphaeroides. Las diferentes variantes del gen bcsA se han clonado en un plásmido bajo un promotor inducible y su actividad se ha analizado en una cepa de Salmonella enteritidis deficiente en c-di-GMP. Los resultados han mostrado que ninguna de las variantes obtenidas por mutación aleatoria han dado lugar a un alelo constitutivamente activo de BcsA y la mutación dirigida en la arginina de la posición 696 provoca la inactivación de la celulosa sintetasa de Salmonella.