Ortega Bravo, Idoia2025-10-082025-10-082025https://academica-e.unavarra.es/handle/2454/55174El virus adenoasociado serotipo 9 (AAV9) es uno de los vectores más usados en terapia génica por su capacidad de transducir diversos tipos celulares. Sin embargo, su eficiencia puede ser limitada en determinados contextos celulares. En este trabajo se ha evaluado el impacto de modificar la cápside del AAV9 mediante la incorporación de residuos de manosa-6-fosfato (M6P) en la posición M471, empleando reacciones de "click chemistry". Esta modificación buscó favorecer el tráfico lisosomal del vector, mejorando así la eficiencia de transducción. Para ello se produjeron versiones del virus con distintos niveles de glicosilación (12 %, 48 % y 100 %), que fueron evaluadas en tres líneas celulares: HeLa, 293T y PKD2. Los resultados mostraron que, si bien la glicosilación no afectó significativamente a la entrada viral (número de genomas intracelulares), sí aumentó de manera dependiente del grado de glicosilación la expresión del transgén GFP en las células 293T y PKD2, pero no en las células HeLa. Esto sugiere que la modificación con M6P mejora el tráfico intracelular y la eficiencia de expresión génica en ciertos contextos celulares, abriendo nuevas posibilidades para el diseño de vectores virales más eficaces y específicos.Adeno-associated virus serotype 9 (AAV9) is a widely used vector in gene therapy due to its broad tropism and low immunogenicity. However, its cellular transduction efficiency can be limited in specific cell types. This study aimed to enhance AAV9-mediated gene delivery by attaching mannose-6-phosphate (M6P) residues to capsid position M471 using click chemistry reactions. M6P is known to facilitate lysosomal trafficking, a process relevant for AAV intracellular transport. Modified AAV9 particles with 12%, 48%, and 100% capsid glycosylation were generated and tested in three cell lines: HeLa, HEK293T, and PKD2. Quantification of viral genomes revealed no significant differences in viral entry. However, transgene (GFP) expression was significantly increased in 293T and PKD2 cells in a glycosylation-dependent manner, while no enhancement was observed in HeLa cells. These findings suggest that M6P modification can selectively improve AAV9 transduction efficiency by enhancing intracellular trafficking, offering a promising strategy for engineering more effective gene therapy vectors.application/pdfspaGlicosilaciónAAV9InfecciónTerapia génica renalGlycosylationAAV9InfectionRenal gene therapyinfo:eu-repo/semantics/bachelorThesis2025-10-06info:eu-repo/semantics/openAccess