Zalba Olave, Tania2017-09-132018-01-012017https://academica-e.unavarra.es/handle/2454/25595En la venta de atún uno de los fraudes más comunes es la sustitución de especies de alta calidad y elevado valor económico por otras distintas a las especificadas en la etiqueta. Por ello, el objetivo del trabajo fue poner a punto una metodología rápida, sencilla y de elevada especificad para la detección de especies de atún (Thunnus) basada en el ADN. Se ensayaron distintos métodos de extracción de ADN. Atendiendo a la cantidad y calidad de la muestra, los mejores resultados se obtuvieron con un kit comercial (Wizard-DNA Clean-Up), tanto para muestras de productos en fresco (T.alalunga, T.albacares y T.obesus) como en conserva (T. albacares y T.alalunga). Para identificar ausencia/presencia de ADN de las especies seleccionadas y cuantificar la cantidad del mismo, se seleccionaron cebadores que permitieran amplificar secuencias de los genes 16S rDNA, para la detección del género Thunnus, y secuencias específicas de la región control mitocondrial de T.alalunga y T.albacares. Se realizaron ensayos para poner a punto las técnicas de PCR cualitativa y cuantitativa, empleando en el segundo caso fluorocromos inespecíficos (Sybr Green) y sondas específicas (TaqMan). Los resultados mostraron una amplificación positiva con la PCR cualitativa para los tres fragmentos, permitiendo determinar la presencia de este género y especies. Respecto a la PCR cuantitativa, se obtuvo una correcta amplificación para el género Thunnus y T.alalunga por medio de fluorocromos inespecíficos, aunque no se logró con T.albacares. Además, se ha puesto a punto la técnica para cuantificar el fragmento 16S rDNA empleando sondas TaqMan, alcanzando una mayor especificidad.One of most common frauds in the sale of tuna is the replacement of the species specified on the label with others of lower quality and value. Therefore, the purpose of the present work was to develop a fast, sensible and highly specificity DNA based method with the aim to detect and quantify the species included in the products labeled as Thunnus. Different DNA extraction methods were assayed. Attending to the sample quantity and quality, in both fresh (T.alalunga, T.albacares y T.obesus) and canned products (T. albacares and T.alalunga), the optimum results were obtained using a commercial kit (Wizard-DNA Clean-Up). In order to detect the absence or presence of DNA of the studied species and to quantify it, primers to amplify a sequence of the 16S-rDNA gene of Thunnus species and sequences of the control region of the mitochondrial DNA of T.alalunga and T.albacares were selected. Different trials were conducted with the aim to perform qualitative and quantitative PCR methods. For quantitative PCR amplification, non-specific fluorochromes (Sybr Green) and specific probes (TaqMan) were used. The results showed qualitative PCR amplification for the three primers selected, allowing to determine the presence of the species studied. Regarding the quantitative PCR, amplifications were obtained for the genus Thunnus and T.alalunga using Sybr Green. However, T. albacares could not be detected using that method. In addition to Sybr Green, a technique to quantify the 16S rDNA fragment using TaqMan probes has been developed, obtaining as a result a higher specificity.application/pdfspaqPCRPCRThunnus alalungaThunnus albacaresTrabajo Fin de Grado/Gradu Amaierako Lana2017-09-08Acceso abierto / Sarbide irekiainfo:eu-repo/semantics/openAccess