Efectos del 17β- estradiol sobre la expresión de la HSD17B5 en la línea celular de carcinoma de mama MCF-7

Abstract

Los estrógenos son hormonas sexuales que cumplen sus efectos fisiológicos por su unión a receptores nucleares. Se ha descrito que su metabolismo se encuentra desregulado en diversos tumores como el de mama. Estos tumores son frecuentes en mujeres menopáusicas, en donde el nivel plasmático de estrógenos está disminuido. Esta evidencia sugiere una producción estrogénica intratumoral. Una de las enzimas que participa en su biosíntesis es la 17 b-deshidrogenasa de tipo 5. Esta enzima se expresa en varios tejidos, incluida la mama. Cataliza principalmente la reducción de androstenodiona a testosterona, aunque también puede reducir la estrona (E1) a estradiol (E2). Ambos casos pueden provocar un aumento en la concentración de la hormona y, por tanto, mayor efecto proliferativo. Esto la ha convertido en potencial diana terapéutica en los tumores en los que su regulación se encuentra alterada [1-3]. Como es sabido, una hormona puede participar de la regulación de las enzimas que participan en los pasos clave de su formación. El E2 está implicado en el desarrollo de diversos tumores hormonodependientes, como el de mama. Entre las enzimas implicadas en su biosíntesis se encuentra la HSD17B5, por lo que era de especial interés evaluar su posible regulación por estrógenos en este tipo de tumores. Con este propósito nos planteamos: 1. Estudiar el efecto del E2 en la expresión de la HSD17B5 en células de cáncer de mama MCF-7. 2. Analizar si las acciones del E2 sobre la expresión de la HSD17B5 son mediadas por el ERα 3. Analizar la actividad transcripcional del promotor de la HSD17B5 en células de cáncer de mama MCF-7. 4. Analizar si las acciones del E2 sobre la expresión de la HSD17B5 se producen a través de su promotor proximal. MATERIAL Y MÉTODOS: · El efecto del E2 sobre los niveles de expresión de la HSD17B5 se analizó por PCR a tiempo real, en las líneas celulares MCF-7 y HepG2 en presencia y ausencia de un antiestrógeno. · Para el análisis de la actividad promotora del gen HSD17B5 se transfectaron células MCF-7 y HepG2 con plásmidos que contienen un gen quimérico formado por fusión de diferentes construcciones de la región promotora del HSD17B5 con el gen de la luciferasa como gen reporter. · Las condiciones generales de inducción del gen HSD17B5 se estudiaron transfectando células MCF-7 con plásmidos que contenían diferentes construcciones de su promotor, y posterior tratamiento con forskolina, inductor inespecífico que eleva la concentración intracelular de cAMP. · La acción del E2 sobre la actividad promotora del gen HSD17B5 se evaluó transfectando células MCF-7 con los plásmidos que albergan las diferentes zonas del promotor a estudiar, y posterior tratamiento en presencia y ausencia del E2, un inhibidor específico para la hormona y un inductor inespecífico.