Eliminación del gen marcador de selección de plantas transplastómicas de tabaco mediante el sistema de recombinación cre/LOX

Abstract

La transformación plastidial ha tomado un gran interés en los últimos 20 años, debido a sus diversas ventajas, como lo son su carácter poliploide y su herencia materna. En este trabajo se han utilizado las variedades comerciales de Nicotiana tabaccum (tabaco): Havana 503-B y Virginia Gold que han sido transformadas previamente con el vector pL3, el cual incluye el gen tiorredoxina f y el gen marcador aadA (resistencia a espectinomicina y estreptomicina). Una vez transformadas todas la plantas y seleccionadas las plantas transplastómicas (transformadas a nivel del cloroplasto) en un medio con espectinomicina, se considera recomendable eliminar el gen marcador. Esta eliminación se realiza a través de la recombinasa Cre que se introduce en el genoma nuclear por medio de la bacteria Agrobacterium tumefaciens. La recombinasa Cre reconoce las regiones lox que flanquean el gen marcador aadA y lo elimina del genoma plastidial. Los resultados de Southern blot muestran que la eliminación del gen aadA se ha producido en un 34% de las plantas de variedad Havana 503-B y en un 39% de las Virginia Gold. Estas plantas son heteroplásmicas, ya que mantienen un bajo porcentaje de plastomas que incluyen el gen marcador.