(2021) Jiménez Montenegro, Lucía; Iturmendi Vizcay, Nerea; Urrutia Vera, Olaia; Escuela Técnica Superior de Ingeniería Agronómica y Biociencias; Nekazaritzako Ingeniaritzako eta Biozientzietako Goi Mailako Eskola Teknikoa
La leche de vaca contiene principalmente dos tipos de β-caseína, la A1 y la A2. En los últimos años, se ha reportado la posible relación del genotipo A1 de la β-caseína y la intolerancia a la leche. Surge así la leche A2, que contiene solo β-caseína A2, como una alternativa en el sector lácteo. En este contexto, el objetivo del trabajo fue desarrollar un método PCR en tiempo real (qPCR) basado en sondas para la detección de los alelos A1 y A2 del gen CSN2 de la β-caseína. En primer lugar, se comparó la idoneidad de 4 métodos de extracción de ADN a partir de las células somáticas de la leche, determinando que el más óptimo fue el kit Nucleospin Tissue. Para la validación del método qPCR se emplearon tanto muestras de ADN de referencia como de ADN de animales genotipados. Se determinó que el límite de detección absoluto con las muestras de referencia era de 73 y 730 copias de ADN para el alelo A1 y el A2, respectivamente. En cuanto a las muestras genotipadas, fue de 30,4 y 60,8 copias para el alelo
A2 y el A1, respectivamente. Por su parte, el límite de detección relativo fue del 5% y 10% en mezclas del alelo A1 en A2 en las muestras de referencia y en las genotipadas, respectivamente. En conclusión, el método presenta buena sensibilidad y especificidad en la detección del alelo A1 y A2, lo que permitiría realizar el control de calidad de la leche A2 y verificar la ausencia de β-caseína de tipo A1.