Tesis doctorales DCS - OZS Doktoretza tesiak

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http://hdl.handle.net/2454/14766

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Analysis of the association between polymorphisms in intergenic regions of Staphylococcus aureus genes involved in biofilm formation and periprosthetic joint infections
(2022) Morales Laverde, Liliana Andrea; Lasa Uzcudun, Íñigo; Solano Goñi, Cristina; Ciencias de la Salud; Osasun Zientziak
In this thesis, we have focused on studying variants found in IGRs adjacent to the most important genes involved in S. aureus biofilm formation; the icaADBCR locus, and the genes encoding the family of surface adhesins. For this purpose, we sequenced the whole genome of a collection of 71 S. aureus isolates from periprosthetic joint infections (PJI) and wound infections stored at the Clinical Bacteriological Laboratory of the Sahlgrenska University Hospital and at the Culture Collection University of Gothenburg (CCUG), respectively. In the first chapter, we explored the regulatory regions of the icaADBCR locus to identify patterns that might be associated with an increased capacity of the isolates to produce PIA/PNAG and form a biofilm. This study compared the regulatory regions of the icaADBCR locus in the genomes of PJI and wound isolates with those in the genome of the reference strain MW2. From these analyses, strains were grouped based on the SNPs found in the IGRs of the operon and also within the coding region of the transcriptional regulator IcaR. These regions showed high conservation rates, and no pattern associated with the origin of the isolates, either PJI or wounds, was detected. On the other hand, using transcriptional fusions between the regulatory region of the icaADBCR locus and the green fluorescent protein gene (gfp), we demonstrated that the expression of icaADBC genes was not affected by the presence of variations in IGRs. Notably, a SNP within the coding region of icaR, which results in an amino acid change in the transcriptional repressor IcaR V176E, led to a significant increase in the transcription of the icaADBC operon and the production of PIA/PNAG. Using a Galleria mellonella infection model, we were able to demonstrate a significant reduction in S. aureus virulence associated with the increase in PIA/PNAG production. In the second chapter, we focused on analyzing the association between SNPs in the promoter regions of genes encoding adhesion-related proteins with adhesins expression levels and therefore, the ability of the strain to adhere to medical devices. Genome analyses of PJI and wound isolates showed different profiles in the content of adhesin-encoding genes. Some of these, such as sasG and cna, were lineage-associated, and fifteen genes were present in the whole collection of strains. When the variability in the SNPs contained in regulatory regions that control the expression of each adhesin was investigated, different variation rates were found among the isolates. Following the same approach as in chapter I, based on transcriptional fusions between regulatory regions and the gfp gene, results showed that each genetic lineage contained a specific profile of adhesins expression under the same environmental condition. Moreover, we developed a biomaterial-associated murine infection model together with a metagenomic analysis to simultaneously compare the capacity of different S. aureus isolates to colonize medical implants. In summary, our results evidenced that SNPs in the IGRs flanking the genes encoding factors important for biofilm development may contribute to the generation of variability in the capacity of S. aureus to colonize medical implants. In particular, our results revealed that IGRs controlling the expression of the icaADBC locus and production of the PIA/PNAG exopolysaccharide are highly conserved and that very few silent SNPs can be detected between strains. On the contrary, SNPs in the IGRs of genes encoding surface adhesins provide a profile of proteins expression that is specific for each S. aureus clonal complex (CC). Altogether, these studies emphasize the importance of investigating the potential impact of SNPs inside IGRs on gene expression and specific bacterial traits, such as pathogen colonization success.
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Biological pretreatment of rice husks with the white-rot fungus pleurotus ostreatus: the role of laccase activity
(2021) Durán Sequeda, Dinary Eloísa; Sierra Ramírez, Rocío; Pisabarro de Lucas, Gerardo; Ciencias de la Salud; Osasun Zientziak; Universidad Pública de Navarra / Nafarroako Unibertsitate Publikoa
El objetivo principal de la investigación fue determinar la influencia de la composición del medio de cultivo y los compuestos lignocelulósicos en la secreción de enzimas lacasas por P. ostreatus en cultivos sumergidos. Utilizando un enfoque estadístico y sistemático que permitió el control de la composición de los medios de cultivo, se encontraron las condiciones nutricionales óptimas que simultáneamente incrementaban el crecimiento fúngico y la actividad lacasa en ausencia y presencia de sulfato de cobre, un inductor reconocido de esta actividad enzimática. En dichas condiciones se indagó sobre los aspectos bioquímicos transcripciones en P. ostreatus relacionados con la secreción de lacasas, lo cual reveló la participación de transportadores de membrana de alta afinidad por el cobre (CTRs) como candidatos intermediarios de la regulación de tres genes lacasas lacc2, lacc6 and lacc10. Los resultados de la evaluación de la composición de los medios de cultivos sugieren que la regulación de estos trasportadores se encuentra estrechamente ligada a condiciones nutricionales suficientes en carbono y nitrógeno, con una participación central del metabolismo del nitrógeno orgánico en dicho proceso. Este conocimiento fue orientado a determinar el papel de la actividad lacasa en el pretratamiento biológico de la cáscara de arroz con el fin de contribuir a obtener una comprensión más profunda del pretratamiento de la biomasa de lignocelulosa por P. ostreatus en cultivo sumergido.
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Cambios funcionales en el páncreas exocrino y en la morfología pancreática en pacientes con diabetes tipo 1
(2018) Bolado Concejo, Federico; Zozaya Urmeneta, José Manuel; Ciencias de la Salud; Osasun Zientziak
Con el presente estudio queremos analizar la prevalencia de cambios morfológicos, sugestivos de pancreatitis crónica, en el páncreas de diabéticos tipo 1. Se determinará además la prevalencia de insuficiencia pancreática exocrina. Posteriormente se correlacionarán ambos hallazgos: alteración morfológica y función exocrina. Se analizará su relación con factores de la diabetes como años de evolución, control glucémico y complicaciones crónicas. Se investigará por ello además el papel de la autoinmunidad en los cambios funcionales y morfológicos analizando la prevalencia de anticuerpos frente a antígenos del páncreas endocrino y el diagnóstico previo de otras enfermedades autoinmunes. Se analizarán también, por último, las posibles repercusiones clínicas y nutricionales de la alteración morfológica y funcional exocrina pancreática.
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Caracterización del sistema sensorial de dos componentes de Staphylococcus aureus
(2020) Rapún Araiz, Beatriz; Lasa Uzcudun, Íñigo; Ciencias de la Salud; Osasun Zientziak
En este trabajo de tesis hemos evaluado dos aproximaciones diferentes dedicadas a la búsqueda de fármacos que tengan como diana de acción los TCSs. Por un lado, dentro del proyecto 'Nuevas estrategias para el control de infecciones nosocomiales (RTC-2015-3184-1) hemos participado en la evaluación de una colección de fármacos aprobados por la FDA (colección Prestwick) para distintas patologías como posibles agentes antimicrobianos frente a S. aureus. El objetivo era reconvertir alguno de estos fármacos (repurposing) y que además de utilizarse para la finalidad para la que fue descrito, también actuara como antimicrobiano. En el caso concreto de nuestro estudio, el escrutinio se hizo frente al TCS GraRS. La segunda estrategia, recogida en el cuarto capítulo de esta tesis, ha consistido en el desarrollo de dos terapias alternativas frente a S. aureus basadas en inmunoterapias: anticuerpos monoclonales y nanoanticuerpos. Para ello, hemos elegido como diana de acción la HK del TCS esencial WalKR, en particular los anticuerpos se han generado frente al dominio de unión a ligando (ligand-bindig domain, LBD) de la HK. La elección de esta diana se debe a dos razones, por un lado, se trata del único TCS esencial de S. aureus y, por otro lado, ensayos realizados con sueros de pacientes infectados por S. aureus mostraron la presencia de anticuerpos frente a este dominio. A lo largo de la tesis hemos producido anticuerpos monoclonales y nanoanticuerpos frente a diferentes epítopos del LBD. Hemos realizado diferentes ensayos para probar el reconocimiento de la proteína tanto in vitro como in vivo y para analizar el efecto de los anticuerpos en el crecimiento de S. aureus. Los ensayos preliminares indican que varios de los nanoanticuerpos desarrollados activan el crecimiento de la bacteria en lugar de reducir su crecimiento. Este resultado, aunque inesperado, indica que es posible desarrollar nanoanticuerpos capaces de afectar la funcionalidad de la HK y por tanto de bloquear su actividad.
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Comparative and functional analysis of 3’ untranslated regions in Staphylococcus species
(2020) Menéndez Gil, Pilar; Toledo Arana, Alejandro; Ciencias de la Salud; Osasun Zientziak
Una molécula de RNA mensajero (mRNA) está compuesta por una región codificante (CDS) flanqueada por dos regiones no traducidas (UTRs), la 5’UTR y la 3’UTR, respectivamente. En eucariotas, las 3’UTRs son elementos claves en la regulación post-transcripcional. El acortamiento o la desregulación de estas regiones están asociado con diversas enfermedades como el cáncer o trastornos metabólicos. En comparación, el conocimiento de las funciones de las 3’UTRs en bacterias es mucho menor. Durante los últimos años, se ha demostrado que las 3’UTRs bacterianas pueden regular la expresión del mRNA que las contiene al igual que pueden ser reservorios de RNAs no codificantes (ncRNAs). Se les ha vinculado en la regulación de procesos bacterianos esenciales como la virulencia, el metabolismo del hierro y la formación de biofilm. En consecuencia, las 3’UTRs pueden jugar un papel mucho más amplio de lo que se había sugerido inicialmente. Sin embargo, todavía hay muchas cuestiones por resolver, por ejemplo, ¿cuál es el grado de conservación de sus secuencias tanto a nivel intra- como inter-especie? ¿Con qué frecuencia los genes ortólogos de bacterias estrechamente relacionadas mantienen conservadas las 3'UTRs? ¿Cómo afectan las variaciones nucleotídicas a la funcionalidad de las 3'UTRs y, en consecuencia, a la expresión de los mRNAs? En esta Tesis, por medio de análisis comparativos globales de los mRNAs que codifican genes ortólogos en distintas especies del género Staphylococcus, descubrimos que la mayoría de los mRNAs contienen 3’UTRs que no están conservadas. Por el contrario, las 5’UTRs se encuentran más conservadas que las 3’UTRs, sugiriendo un sesgo evolutivo hacia las 3’UTRs. La realización de mapas transcriptómicos de diversas especies de Staphylococcus confirmó que las 3’UTRs de genes ortólogos presentaban variaciones en su longitud además de los cambios en sus secuencias. Con el fin de investigar si esta variabilidad afectaba a la expresión proteica, se crearon mRNA quiméricos fusionando las CDSs de los genes icaR, ftnA y rpiRc de Staphylococcus aureus con las 3’UTRs de los mRNAs ortólogos de diferentes especies del mismo género. Los resultados mostraron que las variaciones nucleotídicas en las 3’UTRs alteraban tanto los niveles de mRNA como de proteína. Estos resultados sugerían que las 3’UTRs de genes ortólogos podían tener funciones distintas en cada especie bacteriana. Los cambios en los niveles de expresión podían ser explicados por la presencia o ausencia de elementos reguladores específicos localizados en las diferentes 3’UTRs. Las variaciones en las secuencias de las 3’UTRs podían ocurrir por diferentes procesos incluyendo reordenamientos genómicos, variaciones nucleotídicas locales y transposiciones de secuencias de inserción. Por último, extendiendo los análisis comparativos globales a 3’UTRs funcionales ya descritas, al igual que a los sets completos de mRNAs de Escherichia coli y Bacillus subtilis, descubrimos que la variabilidad de las 3’UTRs es un fenómeno que se encuentra extendido en las bacterias. En resumen, esta Tesis demuestra que las variaciones nucleotídicas en las 3’UTRs, que ocurren de manera natural por la evolución, son capaces de producir cambios en la expresión del mRNA. Esto puede crear funciones reguladoras específicas en una determinada especie, lo que posiblemente podría contribuir a una mayor diversidad entre las especies bacterianas.
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Functional specificity and post-transcriptional regulation of the cold shock proteins in Staphylococcus aureus
(2020) Catalán Moreno, Arancha; Toledo Arana, Alejandro; Lasa Uzcudun, Íñigo; Ciencias de la Salud; Osasun Zientziak
En esta Tesis se han descifrado aspectos relevantes sobre las funciones de las proteínas CSPs de Staphylococcus aureus y su regulación, que pueden ser extrapoladas a otras bacterias. Específicamente, demostramos que sólo un amino ácido es suficiente para conferir la especificidad funcional de CspA en S. aureus y sugerimos que las CSPs no compartirían las mismas dianas a pesar de tener una gran homología proteica. Al mismo tiempo, destacamos la importancia de la termorregulación mediada por estructuras de ARN que controlan la traducción de las proteínas CspB y CspC cuando S. aureus abandona su hospedador y pasa al ambiente, un mecanismo de regulación post-transcripcional que parece estar extendido en el mundo bacteriano.
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Genetic tools derived from Staphylococcus aureus for biotechnological applications in Gram-positive bacteria
(2021) Dorado Morales, Pedro; Lasa Uzcudun, Íñigo; Solano Goñi, Cristina; Ciencias de la Salud; Osasun Zientziak
Staphylococcus aureus is a versatile human pathogen that has emerged as one of the most successful infectious agents of recent times, able to cause a range of diseases including skin and soft tissue infections, endocarditis, sepsis, pneumonia, osteomyelitis, bacteremia, and abscesses in organ tissues. Besides its clinical relevance, S. aureus has served as a model to study fundamental cellular processes, such as biofilm formation, the regulatory functions of small RNAs or growth and division of spherical cocci. Based on the accumulated knowledge of S. aureus biology, the availability of database resources and the advances in high-throughput genome sequencing, in this work we have aimed at developing new genetic tools derived from S. aureus for biotechnological applications in Gram-positive bacteria.
Embargo
Isolation of a new Tuber borchii strain and characterization of its transcriptomics and volatile compounds profile in vitro cultures
(2024) Chuina Tomazeli, Emilia; Pisabarro de Lucas, Gerardo; Salman, Hesham; Ciencias de la Salud; Osasun Zientziak; Gobierno de Navarra / Nafarroako Gobernua
Esta tesis doctoral describe el aislamiento, caracterización transcriptómica y compuestos volátiles de una nueva cepa de T. borchii obtenida a partir de un aislado natural. Establecer cultivos de trufas axénicas es una tarea desafiante y rara vez se logra. Sin embargo, tener acceso a diversas cepas es fundamental para avanzar en los estudios de biología molecular y establecer simbiosis micorrízica en estas especies. En este estudio, se realizó un análisis de transcriptoma del micelio vegetativo de T. borchii cultivado en diferentes sustratos en cultivos sumergidos. Nuestro objetivo no era comparar comportamientos en varios medios, sino establecer una comprensión fundamental del comportamiento de T. borchii en cultivos axénicos. En este contexto, la investigación se centró en genes que codifican enzimas integrales de las vías metabólicas centrales (que comprenden la glucólisis, el ciclo del TCA, el ciclo del glioxilato y la cadena respiratoria), genes afiliados a categorías de metabolitos secundarios y genes que gobiernan la generación de compuestos aromáticos volátiles. Además, realizamos un time course del crecimiento del micelio de T. borchii, identificando compuestos volátiles en diferentes tiempos y condiciones de cultivo. También se realizó una evaluación sensorial del micelio. La tesis también abarcó un segmento industrial, donde se probaron tecnologías para la conservación prolongada del micelio. Más allá de la delimitación de nuevas cepas, los análisis transcriptómicos insinúan que, incluso en condiciones aeróbicas con una expresión genética mínima vinculada a la cadena de transporte de electrones, T. borchii exhibe una mayor síntesis de alcohol deshidrogenasas y quinasas a nivel de sustrato. En particular, también se observó la expresión de genes de desintoxicación contra especies reactivas de oxígeno (ROS).
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lnsights into bacterial functional amyloids using the staphyiococcal Bap protein asan amyloid model
(2022) Matilla Cuenca, Leticia; Valle Turrillas, Jaione; Ciencias de la Salud; Osasun Zientziak
Los arniloides funcionales son componentes clave de la matriz del biofilrn de muchas bacterias. Estas estructuras proporcionan resistencia a las proteasas y a condiciones adversas de desnaturalización, y refuerzan y dan integridad a la estructura del biofilrn. La proteína Bap (Biofilrn associated protein) de Staphylococcus aureus es una proteína de superficie capaz de formar estructuras de tipo arniloide. Bap es un miembro de la familia BAP que comprende proteínas de alto peso molecular, que contienen un dominio elevado de repeticiones y que desempeñan importantes funciones en la formación de biofilrns y en la virulencia. Cabe destacar que las proteínas BAP están ampliamente distribuidas entre las bacterias Grarn positivas y Grarn negativas del biofilrn formado por la rnicrobiota intestinal. Utilizando Bap de S. aureus como modelo de arniloide funcional, en esta tesis hemos investigado si la formación de biofilrns por ensamblaje de agregados arniloides es un mecanismo extendido entre las proteínas BAP de la rnicrobiota intestinal. En el Capítulo I demostrarnos que Esp, una proteína ortóloga a Bap producida por Enterococcus faecalis, forma agregados de tipo arniloide en condiciones ácidas. Demostrarnos que la región N-terrninal de Esp comprende un elevado número de péptidos arniloides y forma estructuras fibrilares con características arniloides, tal y corno demuestran los análisis de microscopía electrónica, las pruebas biofísicas y la unión de los agregados proteicos a colorantes indicativos de arniloides. La región N-terrninal de Esp es capaz de inducir un comportamiento rnulticelular en bacterias que carecen de Esp, tanto cuando se añade exógenarnente al cultivo corno cuando se expresa a partir de un plásrnido. Más adelante, en el Capítulo II, demostrarnos que las proteínas BAP de la rnicrobiota intestinal contienen dominios con propiedades arniloides. Utilizando el sistema generador de arniloides dependiente de curli (C-DAG) validarnos las propiedades arniloidogénicas de los dominios predichos. Caracterizarnos los dominios arniloidogénicos mediante técnicas microscópicas, bioquímicas y biofísicas para concluir que las proteínas BAP de las bacterias patobiontes y comensales del intestino forman estructuras de tipo arniloide. Por lo tanto, la polimerización de proteínas rnonornéricas en arniloides funcionales parece ser un mecanismo generalizado de las proteínas de la familia BAP de la rnicrobiota intestinal. Con el fin de controlar la polimerización de proteínas arniloides en bacterias patógenas, en el Capítulo III analizarnos las propiedades anti-arniloides de una batería de polifenoles. Identificarnos que los flavonoides quercetina, rniricetina y escutelareína inhiben específicamente el biofilrn mediado por Bap en cepas de S. aureus y en otras especies de estafilococos que expresan Bap. Demostrarnos que los polifenoles no afectan a la expresión de Bap, sino que inhiben el ensamblaje de Bap en estructuras arnioides. Además, la inoculación subcutánea de quercetina y rniricetina inhiben la colonización de una cepa de S. aureus que expresa Bap en catéteres implantados en un modelo modelo rnurino de infección por catéter. Por otro lado, decidirnos utilizar los arniloides y beneficiarnos de sus propiedades para construir biofilrns funcionales. En el Capítulo IV, crearnos biofilrns funcionalizados mediante la ingenierización de la proteína Bap con dominios funcionales. Corno prueba de concepto, decoramos la superficie bacteriana con etiquetas con diferentes funciones que incluyen la unión de iones metálicos, la emisión de fluorescencia, la adhesión y la inmovilización covalente de moléculas. Utilizando estas herramientas, demostrarnos el papel dual de Bap, corno adhesina en la superficie celular o corno componente extracelular de la matriz del biofilrn, mediante la simple modulación del pH del medio. Finalmente, crearnos biofilrns funcionalizados añadiendo exógenarnente un dominio arniloidogénico de Bap ingenierizado. Con este enfoque, somos capaces de inducir la formación del biofilrn de forma heteróloga en bacterias no modificadas genéticamente.
Embargo
Noncontiguous operon atlas in Staphylococcus aureus
(2023) Iturbe Sanz, Pablo; Lasa Uzcudun, Íñigo; Ciencias de la Salud; Osasun Zientziak
In previous work from the group, we described the existence of a new transcriptional architecture that we call a noncontiguous operon (NcO). NcOs consist of groups of genes that are transcribed on the same RNA molecule, although genes that are transcribed in the opposite direction separate them. The mRNA of the gene transcribed in the opposite direction is full-length complementary and therefore antisense to the mRNA of the operon. Unlike classical operons, whose presence in the genome is predicted based on theoretical criteria of proximity between genes and biological function of the encoded proteins, the presence of NcOs cannot be determined theoretically and it is necessary to resort to transcriptomic analyses to demonstrate the co-transcription of non-contiguous groups of genes. As a continuation of this line of research, in this thesis we decided to determine the map of NcOs present in the genome of a bacterium. This information would allow us to know the abundance of this transcriptional architecture and thus analyze whether they have common elements or related functions. We decided to use Staphylococcus aureus as a model for four reasons: (I) it is the bacterium in which we first described this transcriptional architecture, (II) we had transcriptomic data obtained from the Illumina platform that could be useful in our study, (III) we have experience in its genetic manipulation and (IV) it has enormous clinical relevance due to its versatility as a pathogen and the existence of multidrug-resistant bacteria.
Open Access
Novel strategies for treating biofilm and MRSA associated infections
(2021) Prieto Mariscal, Juana María; Latasa Osta, Cristina; Ciencias de la Salud; Osasun Zientziak
En esta tesis hemos trabajado en dos estrategias, un cribado fenotípico y otro frente a una diana específica, que podrían ayudar a ampliar las alternativas terapéuticas frente a S. aureus. En el primer capítulo, nos hemos centrado en la capacidad de esta bacteria para formar biofilms, y en el problema que esto implica. En el segundo capítulo, nos hemos fijado un objetivo alternativo para 'desarmar' a S. aureus, centrándonos en la participación del sistema de dos componentes (TCS) GraXRS en la capacidad de S. aureus para contrarrestar las barreras del sistema inmune innato del huésped.
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Operones no-contiguos: una nueva estrategia para coordinar la expresión de genes en bacterias
(2020) Sáenz Lahoya, S.; Lasa Uzcudun, Íñigo; Ciencias de la Salud; Osasun Zientziak
En esta tesis demostramos la existencia de un nivel superior de organización en la estructura del operón que denominamos operón no-contiguo y que consiste en un operón que contiene un gen o genes que se transcriben en la dirección opuesta al resto del operón. Esta nueva arquitectura de transcripción está ejemplificada por los genes menE-menC-MW1733-ytkD-MW1731 que están implicados en la síntesis de menaquinona en Staphylococcus aureus. Nuestros resultados indican que los genes menE-menC-ytkD-MW1731 se transcriben como una unidad de transcripción, mientras el gen MW1733, ubicado entre menC e ytkD, se transcribe en dirección opuesta. Esta organización genética genera transcritos solapantes cuya expresión está regulada a través del procesamiento mediado por RNasa III y por un mecanismo de interferencia transcripcional. El operón menE-menC-MW1733-ytkD-MW1731 es necesario para la síntesis de menaquinona, un intermediario de la cadena transportadora que tiene por función ceder los electrones a los citocromos. La sobreexpresión de MW1733 es capaz de reducir los niveles de menE-menC y en consecuencia la síntesis de menaquinona reduciendo la velocidad de crecimiento de la bacteria y produciendo colonias de tamaño muy pequeño, que se denominan Small Colony Variants (SCV). El fenotipo SCV es característico de aislados clínicos de S. aureus procedentes de infecciones persistentes y es un fenotipo que revierte cuando las bacterias se crecen en el laboratorio. Nuestros resultados indican que la arquitectura de transcripción del operón menE-menC‑MW1733-ytkD-MW1731 podría explicar la variación de fase característico del fenotipo SCV.
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Papel de los sistemas de dos componentes de Staphylococcus aureus en la susceptibilidad a complestatina y corbomicina y en la regulación génica en ausencia de fosforilación
(2022) Gómez Arrebola, Carmen; Lasa Uzcudun, Íñigo; Solano Goñi, Cristina; Ciencias de la Salud; Osasun Zientziak
Staphylococcus aureus es una bacteria versátil que se puede encontrar estableciendo una relación comensal en la piel de, aproximadamente, el 30% de la población sin causar ningún problema. Sin embargo, cuando ésta atraviesa la barrera epitelial y dependiendo del estado inmunológico del portador, puede causar patologías leves, como los abscesos, o severas, como la endocarditis u osteomielitis. Para el tratamiento de estas patologías, existe un amplio abanico de fármacos, no obstante, S. aureus ha desarrollado mecanismos que le permiten incrementar su resistencia y evadir el efecto de estos antibióticos. En el capítulo I de esta tesis doctoral, hemos analizado la implicación de los TCSs de S. aureus en el posible desarrollo de resistencia a dos antibióticos glicopéptidos de reciente descubrimiento, la complestatina (Cm) y la corbomicina (Cb). Para ello, hemos estudiado la susceptibilidad frente a ambos antibióticos de una colección compuesta por mutantes simples en cada TCS en la cepa MW2 y otra compuesta por derivados de una cepa mutante múltiple en todos los TCSs no esenciales (ΔXV) complementados con un plásmido portador de un único TCS. Con ayuda de estas colecciones, observamos que el sistema VraSR es el único que controla la susceptibilidad de S. aureus a la Cm y Cb sugiriendo que uno o varios componentes específicos del regulón de VraSR podrían ser los responsables de este control. Estudiando el regulón de VraSR en profundidad, determinamos que la regulación directa de SpdC e indirecta de SagB por parte de este TCS podrían estar relacionadas con la menor susceptibilidad que presentan las cepas portadoras del sistema VraSR. Al estar SpdC y SagB implicados en la longitud de las cadenas de azúcar del peptidoglicano, analizamos la posible presencia de cambios en la composición del mismo en los mutantes objeto de estudio. De entre las cepas estudiadas, se apreció un incremento en la cantidad de muropéptido compuesto por dímeros M5-5Gly-M4-1Ala en la cepa mutante en vraSR, pero no se pudo demostrar si este cambio está relacionado con la mayor susceptibilidad de esta cepa a la Cm y Cb. Por otra parte, el capítulo II está dedicado a revisar las evidencias que demuestran la regulación ejercida por los TCSs en su estado no fosforilado, lo que supone un cambio de paradigma en la regulación de los TCSs. Finalmente, en el capítulo III, hemos analizado la regulación de la expresión del operón icaADBC y de otros factores de virulencia por parte del TCS ArlRS. En concreto, analizamos como la forma fosforilada y no fosforilada de ArlR regulan la expresión de icaADBC y del represor icaR, responsables de la producción del exopolisacárido PIA/PNAG, elemento mayoritario del biofilm de S. aureus. Los resultados indicaron que la forma no fosforilada de ArlR actúa como represor de icaR causando un aumento de la producción de las proteínas IcaADBC y un aumento de la producción de PIA/PNAG.
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Papel del sST2 en la fibrosis miocárdica en la estenosis aórtica severa
(2022) Arrieta Paniagua, Vanessa; López Andrés, Natalia; Ciencias de la Salud; Osasun Zientziak
Los pacientes con estenosis aórtica desarrollan hipertrofia del ventrículo izquierdo (VI) en respuesta a la sobrecarga de presión. La fibrosis miocárdica tiene un papel fisiopatológico importante en este proceso de remodelado VI, así como claro valor pronóstico. La resonancia magnética nuclear (RMN) cardiaca con las secuencias de realce tardío (RT) nos permite identificar y cuantificar la fibrosis focal de reemplazo, la cual está asociada a una evolución desfavorable en los pacientes con estenosis aórtica severa. El ST2 soluble (sST2) es un marcador de fibrosis cardiaca y está involucrado en enfermedades inflamatorias. En la estenosis aórtica está elevado y parece tener valor pronóstico. En este estudio hemos investigado los efectos del sST2 en fibroblastos cardiacos humanos sobre el estrés oxidativo, la inflamación, la activación de miofibroblastos y la síntesis de colágeno, así como su papel patológico en la estenosis aórtica. Por otro lado, hemos investigado si los niveles de sST2 en sangre se asocian con el RT evaluado mediante RMN en pacientes con estenosis aórtica severa.

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