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Estudio de los mecanismos inmunosupresores en cáncer

La inmunoterapia con bloqueadores de señalización por moléculas de control inmunitario PD-1/PD-L1 tiene como objetivo interferir con la señalización mediada por estas moléculas con el fin de potenciar y reactivar el sistema inmunitario y, así, obtener una inmunidad antitumoral. Sin embargo, algunos pacientes no responden frente a estas terapias. Esta resistencia se debe principalmente a la co-expresión de moléculas de control inmunitario adicionales, como LAG-3 en cáncer de pulmón no microcítico. Por ello, la generación de anticuerpos biespecíficos con capacidad de unión a dos dianas de forma simultánea resulta una terapia prometedora. La especificidad de unión dual permite el bloqueo simultáneo de dos vías de señalización diferentes, facilitando así la re-dirección de células inmunitarias a células tumorales. En el presente proyecto se ha generado un anticuerpo biespecífico contra los puntos de control inmunitario PD-1 y LAG-3 de ratón, con el fin de estudiar la expresión del mismo en diferentes líneas celulares. Para ello, en primer lugar, se ha diseñado y generado la construcción del anticuerpo biespecífico anti-PD-1 y anti-LAG-3 y se ha clonado en un vector de expresión lentiviral. A continuación, se han generado partículas lentivirales con la construcción mediante la transfección de células HEK 293T y se ha determinado el título por transducción de esta misma línea celular. Además, se ha establecido un sistema de visualización del anticuerpo biespecífico fusionado a GFP en las líneas celulares 3LL, MC38 y LACUN-3. Este proyecto es la base del estudio de la eficacia de los anticuerpos biespecíficos frente a las inmunoterapias actuales.

Immune checkpoint immunotherapy based on PD-1/PD-L1 blockade aims to interfere with signaling by these molecules to enhance and reactivate the immune system, and thus obtain antitumor immunity. However, some patients do not respond to these therapies. This resistance is mainly due to expression of additional immune checkpoint molecules such as LAG-3 in nonsmall cell lung cancer. Therefore, the generation of bispecific antibodies with the ability to bind to two targets simultaneously is a promising therapy. The dual binding specificity allows simultaneous blocking of two different signaling pathways, thus facilitating the re-direction of immune cells to tumour cells. The aim of this project is to generate a bispecific antibody against mouse immune checkpoints PD-1 and LAG-3, in order to study its expression in a collection of cell lines. To achieve this, the construction of the biespecific anti-PD-1 and anti-LAG-3 antibody has been designed, generated and cloned into a lentiviral expression vector. Subsequently, lentiviral particles with the construct were generated by transfection of HEK 293T cells and their titer was quantified by standard techniques. In addition, a direct life visualization method for the bispecific antibody fused to GFP was established in 3LL, MC38 and LACUN-3 murine cancer cell lines. This project constitutes the basis for the study of the efficacy of bispecific antibodies against current immunotherapies.