Validación de la funcionalidad de la forma no fosforilada del regulador de respuesta SrrA de Sthaphylococcus aureus mediante plásmidos reporter.
| dc.contributor.advisorTFE | Echeverz Sarasúa, Maite | |
| dc.contributor.advisorTFE | Lasa Uzcudun, Íñigo | |
| dc.contributor.affiliation | Escuela Técnica Superior de Ingeniería Agronómica y Biociencias | es_ES |
| dc.contributor.affiliation | Nekazaritzako Ingeniaritzako eta Biozientzietako Goi Mailako Eskola Teknikoa | eu |
| dc.contributor.author | Chalezquer Izquierdo, Iñigo | |
| dc.date.accessioned | 2025-10-09T14:23:42Z | |
| dc.date.issued | 2025 | |
| dc.date.updated | 2025-10-07T09:51:10Z | |
| dc.description.abstract | Los sistemas de dos componentes (TCS) bacterianos, compuestos por una histidina quinasa (HK) y un regulador de respuesta (RR), son el principal sistema sensorial de las bacterias. Ante un determinado estímulo, la HK se autofosforila en un residuo histidina conservado en su secuencia. Posteriormente, este grupo fosfato se transfiere a un residuo aspartato del RR, y este regulador en su forma fosforilada regula la expresión de genes diana para adaptar la fisiología de la bacteria a la condición ambiental específica. Además de este proceso de regulación canónico, evidencias recientes sugieren que el RR también tiene actividad reguladora en su forma no fosforilada. La finalidad de este trabajo es contribuir a generar herramientas que permitan al Laboratorio de Patogénesis Microbiana investigar la actividad de los RR en su forma no fosforilada. Para ello, se ha elegido como bacteria modelo a Staphylococcus aureus y como RR el regulador de respuesta SrrA. El trabajo ha consistido en el diseño y construcción de plásmidos reporteros en los que la región promotora de genes seleccionados en base a los resultados de un análisis transcriptómico previo se han clonado delante del gen de la GFP, de forma que la expresión del gen de la GFP dependerá de los promotores seleccionados. La expresión de la proteína GFP de los plásmidos reporteros construidos ha sido analizada en una cepa de S. aureus que contiene la forma no fosforilada de SrrA o la forma constitutivamente fosforilada de la misma. El análisis mediante western blot muestra que SrrA puede actuar como represor (sdhC) o inductor (operón pur) de genes en su conformación no fosforilada, confirmando los resultados obtenidos en el análisis transcriptómico. En su conjunto, estos resultados justifican la necesidad de incluir la forma no fosforilada de un RR cuando se quiere establecer el regulón afectado por un TCS en respuesta a una condición ambiental. | es_ES |
| dc.description.abstract | Bacterial two-component systems (TCS), composed of a histidine kinase (HK) and a response regulator (RR), serve as the sensory systems of bacteria. In response to a specific stimulus, the HK phosphorylates on a conserved histidine residue in its sequence. Subsequently, this phosphate group is transferred to an aspartate residue on the RR, which, in its phosphorylated form, regulates the expression of several target genes to adapt the bacterial physiology to that environmental condition. In addition to this canonical regulation process, recent evidence suggests that the unphosphorylated form of the RR also exhibits regulatory activity in the absence of phosphorylation. The aim of this work is to contribute to the development of tools that allow the Microbial Pathogenesis Laboratory to investigate the activity of RRs in their non phosphorylated form. For this purpose, Staphylococcus aureus has been chosen as the model bacterium and SrrA as the RR of interest. The work consisted in the design and construction of reporter plasmids in which the promoter region of genes selected based on previous transcriptomic analysis were cloned upstream of the GFP gene. Thus, GFP expression depended on the regulators controlling the expression of the selected gene. The expression of the GFP protein from the constructed reporter plasmids was analyzed in a S. aureus strain containing either the unphosphorylated form of SrrA or its constitutively phosphorylated form. Western blot analysis showed that SrrA can act as a repressor (sdhC) and as an activator (pur operon) of gene expression in its non-phosphorylated conformation, confirming the results obtained in the transcriptomic analysis. Overall, these results highlight the importance of considering the non-phosphorylated form of an RR when defining the regulon controlled by a TCS in response to an environmental condition. | es_ES |
| dc.description.degree | Graduado o Graduada en Biotecnología por la Universidad Pública de Navarra | es_ES |
| dc.description.degree | Bioteknologiako Graduatua Nafarroako Unibertsitate Publikoan | eu |
| dc.embargo.lift | 2030-06-01 | |
| dc.embargo.terms | 2030-06-01 | |
| dc.format.mimetype | application/pdf | |
| dc.identifier.uri | https://academica-e.unavarra.es/handle/2454/55228 | |
| dc.language.iso | spa | |
| dc.rights.accessRights | info:eu-repo/semantics/embargoedAccess | |
| dc.subject | Staphylococcus aureus | es_ES |
| dc.subject | Reporter | es_ES |
| dc.subject | Sistemas de dos-componentes | es_ES |
| dc.subject | SrrA | es_ES |
| dc.subject | RR fosforilado | es_ES |
| dc.subject | RR no fosforilado | es_ES |
| dc.subject | Staphylococcus aureus | en |
| dc.subject | Reporter | en |
| dc.subject | Two-component system | en |
| dc.subject | SrrA | en |
| dc.subject | Phosphorylated RR | en |
| dc.subject | Non-phosphorylated RR | en |
| dc.title | Validación de la funcionalidad de la forma no fosforilada del regulador de respuesta SrrA de Sthaphylococcus aureus mediante plásmidos reporter. | es_ES |
| dc.type | info:eu-repo/semantics/bachelorThesis | |
| dspace.entity.type | Publication | |
| relation.isAdvisorTFEOfPublication | dce8bd64-382c-4910-ba31-734876ed6ce8 | |
| relation.isAdvisorTFEOfPublication | c654d104-1ae2-41cf-9215-4b4bed3e5ea6 | |
| relation.isAdvisorTFEOfPublication.latestForDiscovery | dce8bd64-382c-4910-ba31-734876ed6ce8 |