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Transfección de células eucariotas mediante electroporación

La transfección, o introducción de material genético en células eucariotas, es una estrategia emergente en el ámbito de la terapia génica con potencial terapéutico frente a una gran variedad de enfermedades genéticas, así como en la investigación o en la producción de compuestos bioactivos. El método más comúnmente empleado para transfectar células en cultivo es el químico (lipofección), aunque existen otras estrategias como los métodos físicos (electroporación) o biológicos (vectores) que pueden presentar ventajas cuando se emplean cultivos primarios, células quiescentes o procedentes de especies poco comunes en el ámbito de los reactivos de laboratorio. Estas limitaciones dificultan la investigación de dianas antivirales en especies como la ovina o caprina. En este TFG se han puesto a punto protocolos de electroporación para la transfección de cultivos primarios ovinos y de células 293-T ajustando parámetros electrofísicos, condiciones de cultivo celular y composición de los buffers de electroporación. Los resultados ponen de manifiesto la expresión de proteínas exógenas y su actividad biológica tanto en 293-T, mediante la expresión de IFN-γ e IL-4, como en fibroblastos ovinos a través de ensayos de actividad antiviral basados en proteínas APOBEC3. Además, se han producido con éxito vectores lentivirales para la expresión de proteínas exógenas. La mejora en los porcentajes de transfección tanto de células empaquetadoras 293-T como de cultivos primarios podría sentar la base para la producción de vectores lentivirales y la evaluación de otras dianas antivirales en especies de interés ganadero.