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Puesta a punto de una técnica de identificación de variantes de la B-caseína en leche

La leche de vaca contiene principalmente dos tipos de β-caseína, la A1 y la A2. En los últimos años, se ha reportado la posible relación del genotipo A1 de la β-caseína y la intolerancia a la leche. Surge así la leche A2, que contiene solo β-caseína A2, como una alternativa en el sector lácteo. En este contexto, el objetivo del trabajo fue desarrollar un método PCR en tiempo real (qPCR) basado en sondas para la detección de los alelos A1 y A2 del gen CSN2 de la β-caseína. En primer lugar, se comparó la idoneidad de 4 métodos de extracción de ADN a partir de las células somáticas de la leche, determinando que el más óptimo fue el kit Nucleospin Tissue. Para la validación del método qPCR se emplearon tanto muestras de ADN de referencia como de ADN de animales genotipados. Se determinó que el límite de detección absoluto con las muestras de referencia era de 73 y 730 copias de ADN para el alelo A1 y el A2, respectivamente. En cuanto a las muestras genotipadas, fue de 30,4 y 60,8 copias para el alelo A2 y el A1, respectivamente. Por su parte, el límite de detección relativo fue del 5% y 10% en mezclas del alelo A1 en A2 en las muestras de referencia y en las genotipadas, respectivamente. En conclusión, el método presenta buena sensibilidad y especificidad en la detección del alelo A1 y A2, lo que permitiría realizar el control de calidad de la leche A2 y verificar la ausencia de β-caseína de tipo A1.

Cow's milk contains mainly two types of β-casein, A1 and A2. In recent years, a possible relationship between A1 genotype of β-casein and milk intolerance has been reported. Thus, A2 milk, which contains only β-casein A2, has emerged as an alternative in the dairy sector. In this context, the aim of the work was to develop a probe-based real-time PCR (qPCR) method for the detection of the A1 and the A2 alleles of CSN2 gene of β-casein. Firstly, the suitability of 4 DNA extraction methods from milk somatic cells was compared, being the Nucleospin Tissue commercial kit the most optimum method. Both reference DNA samples and genotyped animal DNA samples were used to validate the method. The absolute detection limit with the reference samples was determined to be 73 and 730 DNA copies/µl for the A1 allele and for the A2 allele, respectively. For the genotyped samples, it was 30.4 copies/µl for the A2 allele and 60.8 copies/µl for the A1 allele. The relative detection limit was 5% in mixtures of the A1 allele in A2 allele with reference samples, and 10% of the A1 allele in allele in the genotyped samples. In conclusion, results indicated that the method offered good sensitivity and specificity in the detection of A1 and A2 alleles, and it would allow performing quality control of A2 milkand verifying the absence of A1-type β-casein.